Экспериментальное исследование продукта Agexpert Male

С целью определения эффективности БАД AGEXPERT™ MALE по заказу компании VILAVI была проведена оценка действия продукта как средства, тормозящего процессы старения организма, такие как усиление свободнорадикальных процессов (окислительный стресс) и усиление процессов склерогенеза (увеличение концентрации метаболитов соединительной ткани: - гидроксипролина и гликозоаминогликанов) у крыс самцов линии Вистар.

Испытания проводились в Сибирском филиале Национального Института Здоровья. Исследование проводились под руководством профессора Хаснулина В.Л. - руководителя Сибирского филиала Национального института здоровья (С-Петербург). Со стороны экспертного совета VILAVI испытания курировал профессор А.Р. Антонов.

Комментарий профессора А.Р. Антонова:

Мы провели экспериментальное изучение влияния базового продукта AGEXPERT™ MALE на характеристики окислительного стресса и интенсивности процессов склерогенеза  (старения) у крыс, находящихся  в состоянии хронического стресса, вызванного световым десинхронозом (нарушением цикла «день-ночь»). В настоящее время доказано, что хронические стрессы (дистресс), связанные с действием неблагоприятных климато-географических условий проживания, промышленного загрязнения среды, необычных природных или социальных ритмов, нарушающих биологические ритмы жизнедеятельности организма человека, могут становиться причиной преждевременногостарения человека и, соответственно, значительного сокращения продолжительности жизни.

В качестве объекта эксперимента были выбраны крысы - как наиболее адекватные животные для изучения процессов, происходящих в человеческом организме.

Проведенные нами экспериментальные исследования эффективности базового продукта показали, что применение БАД AGEXPERT™ MALE повышает устойчивость экспериментальных животных к хроническому стрессу и его проявлениям: окислительному стрессу, метаболическим расстройствам, избыточной продукции стресс-гормонов, а также способствует замедлению стрессобусловленных процессов старения. Причем воздействие БАД AGEXPERT™ MALE эффективнее, чем фармакологический препарат  (антиоксидант) - токоферол (витамин Е).

Это подтверждается тем, что у крыс экспериментальной группы, получавшей с пищей AGEXPERT™ MALE, усиление перекисного окисления липидов (т.е. продуктов окислительного стресса) к 30 дню эксперимента было на 41% меньше по сравнению с контрольной группой; снижение уровня  активности глютатионредуктазы (фермента антиоксидантной защиты) в сыворотке крови было на 11% меньше, чем в контрольной группе к концу эксперимента. В экспериментальной группе на 45% был меньше и уровень стресс-реакции, оцениваемый по уровню кортикостерона.  В третьей группе, получавшей вместо продукта токоферол (витамин Е),  эффективность коррекции окислительного стресса оказалась значительно меньше, чем в группе, получавшей AGEXPERT™ MALE.

Таким образом, добавление в пищу крысам, находящимся в состоянии хронического стресса, AGEXPERT™ MALE повышает устойчивость животных к стрессированию в значительной мере больше, чем в случае добавки в пищу витамина Е. Обнаруженное у крыс, получавших AGEXPERT™ MALE, значительно меньшее усиление процессов склерогенеза (модель старения) в результате 30-дневного стрессирования по сравнению с контрольной группой, свидетельствует о возможности использования представленной биологически активной добавки для уменьшения процессов старения в результате хронических стрессов. Визуальное сравнение животных разных групп позволило объективно установить в конце эксперимента большую двигательную активность и скорость ориентации в лабиринте у крыс, получавших БАД AGEXPERT™ MALE. Ретроспективный анализ показал, что средняя продолжительность жизни в этой группе была выше на 10,8% в сравнении с другими животными.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют об эффективном влиянии нашего продукта на основные звенья патогенеза старения.

Цель исследования: Изучить влияние БАД AGEXPERT™ MALE на характеристики окислительного стресса и интенсивности процессов склерогенеза у крыс, находящихся  в состоянии хронического стресса, вызванного световым десинхронозом.

Задачи исследования:
- Оценить характеристики окислительного стресса у интактных крыс, находящихся в условиях постоянного освещения,  по сравнению с группой крыс, находящихся в аналогичном световом режиме, но с добавленной в пищу БАД AGEXPERT™ MALE.
- Изучить эффективность влияния БАД AGEXPERT™ MALE на показатели склерогенеза (характеристика скорости старения) у крыс, находящихся в состоянии  хронического стресса, вызванного световым десинхронозом.    

Материалы и методы исследования:
Для изучения влияния БАД   AGEXPERT™ MALE использованы три группы крыс самцов линии Вистар с массой тела 230-260 г. (по 30 животных в группе) в возрасте 20 месяцев,  в течение 30 дней находившихся в условиях ежесуточного постоянного освещения. Первая группа животных - интактная (группа контроля), находилась в аналогичном световом режиме со второй группой, но не получала в пищу  БАД AGEXPERT™ MALE. Вторая группа, в отличие от первой группы, в течение всего эксперимента получала в пищу  БАД AGEXPERT™ MALE. Третья группа животных находилась в аналогичных с первыми двумя группами условиях, но, в отличие от них, получала в пищу вместо БАД три раза в день только фармакологический препарат токоферол (витамин Е).

Исследования содержания глюкокортикоидного гормона кортизола в сыворотке крови проводили с помощью иммуноферментного метода (иммуноферментный набор ЗАО «Вектор-БЕСТ»).  Кровь забирали натощак, в утренние часы, не ранее чем через 12 часов после последнего приема пищи, без антикоагулянтов, центрифугировали 15-20 мин. при 3000 об/мин на холоде. Сыворотку хранили при  -20°С не более 2-3 недель.

Программа биохимических исследований включала в себя  определение следующих показателей в плазме крови: общих липидов, глюкозы, общего билирубина, трансаминаз: АСТ, АЛТ. Биохимические исследования проводили стандартными наборами на биохимическом анализаторе. Методики стандартизировали с помощью стандартных сывороток.

Активность реакций свободнорадикального (перекисного) окисления липидов (ПОЛ) оценивали по содержанию малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови (Steinbrecher U.P.,1990).  Определение активности NADPH2-зависимой глютатион-редуктазы проводили методом H. Horn, F.Bruns (1958). Содержание сульфгидрильных групп (SH-группы) определяли колориметрическим методом с 5,5-дитиобис (2-нитробензойной) кислотой по D.D.M. Wayner et al. (1987).

Определение содержания гликозамингликанов (ГАГ) в сыворотке крови проводили орциновым методом в модификации С.А. Кляцкиной и Р.И. Лифшица (1989). Состояние обмена коллагена оценивали по содержанию оксипролина (ОП) (Шараев П.Н. и др., 1981).

Все исследования осуществлялись на 1-й и 30-й день эксперимента. Статистическую обработку данных проводили с использованием стандартного пакета статистических программ STATISTICA (StatSoft, США) версии 6.0. Количественные данные представлены как M ± m при нормальном распределении показателей.  Достоверность различий определяли по t-критерию Стьюдента для независимых выборок, достоверность присваивалась при значении р < 0,05. Корреляционный анализ проводился по методу Пирсона.

Результаты исследования:
Данные проведенных исследований подтвердили, что круглосуточное постоянное освещение крыс в течение 30 дней вызывает состояние хронического стресса у животных. Это подтверждается повышением уровня глюкокортикоидного гормона - кортизола в сыворотке крови на 77% по сравнению с показателями кортизола в начале эксперимента (рис.1., табл.1.),  а также значительным увеличением в крови концентрации продуктов свободнорадикальных (перекисных) процессов (МДА) и снижением показателей ферментативного и неферментативного звеньев антиоксидантной защиты (окислительный стресс). По данным, приведенным в таблице 1, мы наблюдаем  снижение содержание глютатионредуктазы в сыворотке крови (показатель ферментативного звена антиоксидантной защиты) на 34% по сравнению с началом эксперимента, а также уменьшение концентрации в сыворотке крови сульфгидрильных групп (показатель неферментативного звена антиоксидантной защиты) на 30% по сравнению с началом эксперимента. 

Показатели выраженности окислительного стресса и кортизола  у крыс, находящихся  в состоянии хронического стресса, вызванного световым десинхронозом (1 группа - контроль, 2 группа, получавшая в пищу  БАД AGEXPERT™ MALE, 3 группа- получавшая в пищу токоферол).

Оказалось, что стресс у крыс, обусловленный 30 суточным световым десинхронозом, проявляется, кроме окислительного стресса и повышения концентрации кортизола в крови, изменениями метаболических характеристик и нарушениями функции печени.

Факты нарушения метаболических характеристик в процессе эксперимента, а также снижения функциональной активности печени, также свидетельствует о развитие хронического стресса у контрольной группы животных. Кроме того, по мнению целого ряда исследователей (Коркушко О.В., Калиновская Е.Г., Молотков В.И., 1979; Казакова И.А., Трусова В.В., Черемискина И.Б. ,2003; Абдрашитова А.Т., и др., 2004), метаболические сдвиги (гипергликемия, дислипидемия), а также нарушения функции печени, могут характеризовать темпы старения, активировать избыточную наработку соединительной ткани и стимулировать процессы склерогенеза.

Данные нашего эксперимента подтверждают, что стресс, обусловленный 30 дневным световым десинхронозом, вызывает у крыс контрольной группы усиленную продукцию соединительнотканных элементов: - гликозаминогликанов и  оксипролина (рис.3). Как следует из представленных результатов, 30-дневный стресс вызывает у крыс в контрольной группе достоверное усиление продукции гликозаминогликанов на 78% по сравнению с исходным уровнем в начале эксперимента и усиление продукции оксипролина на 65% по сравнению с исходными показателями.

Другими словами, экспериментальный стресс вызвал у крыс из контрольной группы интенсификацию процессов старения.

Полученные данные позволяют нам, соответственно, оценить влияние добавления в пищу крыс второй группы БАДAGEXPERT™ MALE на процессы старения в процессе эксперимента по сравнению с первой контрольной группой.  Как показывают данные таблицы 2, концентрация гликозаминогликанов в сыворотке крови крыс, получавших в течение 30 суток биологически активную добавку AGEXPERT™ MALE, увеличилась лишь на 20% по сравнению с исходными цифрами; в отличие от контрольной группы, где аналогичный показатель увеличился на 78%.  Примерно такую же картину мы видим и по изменению во второй экспериментальной группе животных: концентрации оксипролина в сыворотке крови,  который увеличился только на 25,3%, к 30 дню хронического стресса. В отличие от второй группы, показатель оксипролина в сыворотке крови крыс первой контрольной группы вырос на 65% по сравнению с исходными данными. Значительно меньше тормозилась экскреция гликозаминогликанов в кровь крыс, получавших в течение 30 суток в качестве протекторной добавки в пищу только токоферол. В этой группе уровень ГАГ в крови увеличился к концу эксперимента на 51%.  Оксипролин в сыворотке крови крыс  3 группы увеличился также достоверно больше чем у крыс второй группы, на 39% больше по сравнению с началом эксперимента, и на 14% больше чем в экспериментальной группе на 30 день эксперимента (табл.2).

Таблица 2
Показатели усиления продукции гликозаминогликанов (ГАГ) и оксипролина (ОП)  у крыс, находящихся  в состоянии хронического стресса, вызванного световым десинхронозом (1 группа -контроль, 2 группа, получавшая в пищу  БАДAGEXPERT™ MALE, 3 группа -получала токоферол).

Отмечено также, что у крыс экспериментальной группы, получавшей с пищей БАД AGEXPERT™ MALE, усиление перекисного окисления липидов к 30 дню эксперимента было на 41% меньше по сравнению с контрольной группой; снижение уровня  активности глютатионредуктазы в сыворотке крови во второй группе было на 11% меньше, чем в контрольной группе к концу эксперимента; уменьшение концентрации сульфгидрильных групп в сыворотке крови во 2-ой группе также было на 18% меньше, чем к 30 дню эксперимента у крыс контрольной группы (табл.1). Во 2 (экспериментальной) группе на 45% был меньше и уровень стресс-реакции (по уровню кортизола).  В третьей группе, получавшей вместо БАД токоферол (витамин Е), эффективность коррекции оказалась значительно меньше, чем в группе, получавшей БАД AGEXPERT™ MALE. В третьей группе усиление перекисного окисления липидов к 30 дню эксперимента было лишь на 19% меньше по сравнению с контрольной группой; снижение уровня  активности глютатионредуктазы в сыворотке крови во второй группе было на 4% меньше чем в контрольной группе к концу эксперимента; уменьшение концентрации сульфгидрильных групп в сыворотке крови  также было лишь на 6% меньше чем к 30 дню эксперимента у крыс контрольной группы. По данным концентрации кортизола в крови, уровень стресс-реакции у крыс 3 группы был меньше по сравнению с контрольной группой лишь на 25%.

Таким образом, экспериментальное исследование показало, что добавление в пищу крысам, находящимся в состоянии хронического стресса, вызванного световым десинхронозом, БАД AGEXPERT™ MALE, повышает устойчивость животных к стрессированию в значительной мере больше, чем в случае добавки в пищу витамина Е. Это отражается в достоверно меньшей интенсификации процессов перекисного окисления липидов, а также значительно меньшем снижении ферментативного и неферментативного звеньев антиоксидантной защиты по сравнению с крысами контрольной группы, не получавшими названную биологически активную добавку, а также с крысами третьей группы, получавшими в качестве протектора токоферол.   Обнаруженное у крыс, получавших БАД AGEXPERT™ MALE, значительно меньшее усиление процессов склерогенеза в результате 30 дневного стрессирования по сравнению с контрольной группой, свидетельствует о возможности использования представленной биологически активной добавки для уменьшения процессов старения в результате хронических стрессов.

Визуальное сравнение животных разных групп позволило объективно установить в конце эксперимента большую двигательную активность и скорость ориентации в лабиринте у крыс, получавших БАД. Ретроспективный анализ показал, что средняя продолжительность жизни в этой группе была выше на 10,8% в сравнении с другими животными.

Выводы: 
1. Выявлена возможность использования светового десинхроноза  (круглосуточное содержание при постоянном освещении) в качестве модели хронического стресса, сопровождающегося усилением продукции глюкокортикоидного гормона кортизола, интенсификацией окислительного стресса с липидной гипероксидацией, снижением уровня  ферментативной и неферметативной антиоксидантной защитой, а также метаболическими расстройствами.
2. Показано, что хронический стресс, вызванный световым десинхронозом, может стать причиной ускорения процессов старения живых организмов, проявляющихся в интенсификации склерогенеза.
3. Экспериментально доказано, что применение БАД AGEXPERT™ MALE эффективнее, чем фармакологический препарат - токоферол, и повышает устойчивость экспериментальных животных к хроническому стрессу и его проявлениям: окислительному стрессу, метаболическим расстройствам, избыточной продукции стресс гормонов, а также способствует замедлению стресс обусловленных процессов старения.